Ensayo de viabilidad celular (actividad metabólica) por reducción del compuesto MTT

Aparición del formazano de MTT, a tiempos cortos (izda.) y tras un tiempo mayor (dcha.). Las muestras con mayor actividad metabólica están en los pocillos de la zona superior izquierda.

El MTT es un compuesto perteneciente a la familia de sales de tetrazolio, soluble en agua y con color amarillo.

MTT

Al reducirse, el MTT se convierte en un compuesto de la familia formazanos, de color violeta e insoluble en agua. Para cuantificarlo se suele disolver en un disolvente orgánico, como DMSO (dimetilsulfóxido) y se mide su color mediante la A₅₇₀.

MTT (sal de tetrazolio)
–forma oxidada–
Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio
InChI Key: FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N

formazano del MTT
–forma reducida–
(E,Z)-5-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-1,3-difenilformazano
InChI Key: GIFKVQOPAJDJLO-YQHXDJBWSA-N

NAD(P)H⤻NAD(P)

La actividad metabólica de las células incluye la de las deshidrogenasas. Se considera que la acción sobre el MTT se debe principalmente a las deshidrogenasas mitocondriales, en particular la succinato deshidrogenasa, pero también pueden intervenir reductasas citosólicas o de otros compartimentos subcelulares. Las coenzimas reducidas resultantes (NADH y NADPH) convertirán el MTT en su formazano.

Vemos un ejemplo de ensayo de viabilidad, con muestras en triplicado. El formazano de MTT ya se ha disuelto en DMSO.

• (C) = control positivo (actividad metabólica plena), células en medio de cultivo únicamente.
• (números) = medio suplementado con distintas concentraciones de agente tóxico.
• (SDS) = control negativo (actividad metabólica nula): se añadió el detergente SDS para lisar todas las células.

Experimento virtual

Puedes probar a hacer tu propio experimento de un ensayo de citotoxicidad en un laboratorio virtual.

Alternativas

Como alternativa al MTT se utilizan otros compuestos, en ensayos con el mismo fundamento:

• XTT, que es soluble en agua.
  2,3-bis-(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-2H-tetrazolio-5-carboxanilida  
• MTS, complementado con PMS (metosulfato de fenazina) como intermediario redox.
  3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio  

Ampliación sobre la nomenclatura:

Los tetrazoles son los derivados del tetrazol, un anillo insaturado de 5 átomos de los que 4 son nitrógeno. Tetrazolio es el catión del tetrazol (por protonación de uno de los N).		Los formazanos son los derivados del formazano, una cadena lineal insaturada de 5 átomos de los que 4 son de nitrógeno.	El tiazol es un anillo insaturado de 5 átomos (-ol) con un S (tia) y un N (azo).
tetrazol	tetrazolio	formazano	tiazol

La apertura del anillo de tetrazol (por ej., por reducción) convierte los tetrazolios en formazanos.