1. El tubo se llena con un gradiente de densidad, formado mediante un gradiente de concentración de un soluto adecuado (en este ejemplo, sacarosa, entre un 5% y un 30%). | 2. La muestra (aquí, una mezcla de proteínas) se aplica sobre el gradiente. | ||||
5%
30%
|
d=1.018
d=1.127
|
muestra
|
3. Se coloca el tubo en un rotor basculante y se realiza la centrifugación.
Las moléculas sedimentan de acuerdo con su tamaño, forma y densidad (todo ello determina su coeficiente de sedimentación).
El coeficiente de sedimentación, s, se define como la razón entre la velocidad V a la que sedimenta la molécula (o partícula, en general) y la aceleración centrífuga aplicada, C. Este coeficiente se relaciona con el radio r y la densidad d de la molécula, y con la densidad do y viscosidad del medio, de acuerdo con la fórmula siguiente:
El coeficiente de sedimentación, s (minúscula), tiene unidades de tiempo y habitualmente se mide en unidades Svedberg, S (mayúscula), siendo 1 S = 10-13 segundos.
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[Material adaptado a partir de una animación de John C. Pérez, Texas A&M University, http://ntri.tamuk.edu/centrifuge/centrifugation.html
y un esquema de James V. Bricker, The College of New Jersey, http://bricker.tcnj.edu/tech/BIOL311centrifugation.html
]